Reaģenti peptīdu kondensācijai

Pašlaik peptīdu sintēzē peptīdu reakciju pabeigšanai galvenokārt tiek izmantotas karboksilgrupas aktivācijas metodes. Agrākās izmantotās metodes bija aminoskābju aktivizēšana skābes hlorīdos, azīdos, simetriskos anhidrīdos un jauktos skābes anhidrīdos. Tomēr, ņemot vērā aminoskābju racemizāciju šajos apstākļos, reakcijas reaģentu bīstamību un sagatavošanas sarežģītību, tie pakāpeniski tika aizstāti ar vēlākiem kondensācijas reaģentiem, kurus pēc to struktūras var iedalīt divos veidos.: Galvenie kondensācijas reaģenti ir: Karbodiimīda tips, onija sāls tips (Uronijs).

Galvenokārt ietver: DCC, DIC, EDC.HCl gaidīt. izmantot DCC veic reakciju, pateicoties DCU, pastāv DMF Tam ir ļoti maza šķīdība un veidojas baltas nogulsnes, tāpēc to parasti neizmanto cietās fāzes sintēzē. Tomēr, tā kā tas ir lēts, to var noņemt, filtrējot-šķidrās fāzes sintēzē, un to joprojām plaši izmanto. EDC.HCl Savas šķīdības ūdenī dēļ to bieži izmanto polipeptīdu un proteīnu savienošanai, un tas ir arī diezgan veiksmīgs. Tomēr viens no lielākajiem šāda veida kondensācijas reaģenta trūkumiem ir tas, ka, ja to lieto atsevišķi, būs vairāk blakusreakciju. Tomēr pētījumi liecina, ka, ja tos pievieno aktivizācijas procesa HOBt laikā, HOAt Šādi reaģenti var kontrolēt blakusreakcijas ļoti zemā diapazonā. Reakcijas mehānisms ir šāds:

2. attēls DIC aktivizācijas reakcijas mehānisms

Onija sāls tipa kondensācijas reaģentiem ir augsta reaktivitāte un ātrs ātrums, un tagad tos plaši izmanto, galvenokārt ietverot: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP, gaidiet. Lietojot šo reaģentu, ir jāpievieno organiska bāze, piemēram, diizopropiletilamīns (DIEA), N- metilmorfolīns (NMM). Aminoskābi var aktivizēt tikai pēc šī reaģenta pievienošanas. Reakcijas mehānisms ir šāds:

Cietās -fāzes peptīdu sintēzē izmantotie sveķi parasti ir polistirola-divinilbenzola materiāli, kuru izmēri svārstās no 75 līdz 150 μm. Šķērssaites pakāpe ir no 1-2%, un lielākajai daļai pašlaik izmantoto ir 1%, jo pie šīs sveķiem ir laba DMF,-. uzbriest, un tam ir trīsdimensiju tīkla struktūra, un reaģējošās molekulas var brīvi pārvietoties sveķu iekšpusē. Vissvarīgākā sveķu daļa ir savienojošā svira, kas ir savienota ar sveķiem vienā galā un kalpo kā reakcijas vieta otrā galā. Pašlaik plaši izmantotie sveķi ir: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA gaid. PAM, MBHA izmanto BOC stratēģijā, jo tas ir ļoti stabils pret skābi, tam jābūt HF, TFMSA To var griezt tikai stipras skābes apstākļos.

Kad ir pabeigta cietās -fāzes peptīdu sintēze, ir jāizvēlas piemērots šķelšanās reaģents, lai atdalītu peptīdu no sveķiem, un pēc tam nogulsnē ar ledus ēteri, savāc nogulsnes ar centrifugēšanu un HPLC Atdala, attīra un sasaldē, lai iegūtu galīgo peptīda produktu.

Atšķirīgo izvēlēto sveķu un aminoskābju secību dēļ šķelšanas laikā izvēlētās šķelšanās metodes nav gluži vienādas. Parasti šķelšanās apstākļus izvēlas skābos apstākļos. PAM, MBHA sveķi, parasti izmanto HF griešanai, p-krezols, p-merkaptofenols, anizols un citi reaģenti jāpievieno griešanas procesā. Un Vangam, Rink{5}}Amīdam, Trt sveķiem, ko parasti izmanto TFA griešanai, griešanas procesā pievienojiet etilēnglikolu, anizola sulfīdu, ūdeni, triizopropilsilānu, fenolu utt.

Šos piedevu reaģentus galvenokārt izmanto kā karbokācijas uztveršanas reaģentus. Mērķis ir uztvert šķelšanās reakcijas laikā radušos karbokāciju un samazināt blakusreakcijas, ko izraisa šo karbokationu jonu uzbrukums dažām aminoskābju sānu ķēdēm. Aminoskābes, kas, visticamāk, izraisa blakusparādības, ir: Trp, Tyr. Griešanas reaģenta deva parasti ir 10-15 ml/g sveķu.

Parasti lietotās griešanas attiecības: HF/p-krezols/p-tiokrezols(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2,5/2,5), Reakciju parasti veic istabas temperatūrā 2 h-4h.

Cietās -fāzes peptīdu sintēzē mēs bieži sastopamies ar peptīdu sintēzes neveiksmes vai zemas sintēzes efektivitātes problēmu. Galvenais iemesls ir peptīdu secība, jo uz sveķiem veidojas dažas peptīdu sekvences. -Salocīšana maina sveķu uzpūšanās īpašības, kā arī var aprakt reakcijas aktīvās vietas sveķos, apgrūtinot reakcijas norisi. Pašreizējie ziņojumi par to liecina

Izmantojiet jauktus šķīdinātājus, DMSO/DMF, 6N guanidīna/DMF šķīdumu

Palieliniet reakcijas temperatūru vai izmantojiet mikroviļņu metodi

Izmantojiet haotropos sāļus, LiCl, NaClO4 pagaidiet.

Izmantojiet tos ar labākām uzbriedināšanas īpašībām PEG{0}}PS sveķus, vienlaikus samazinot sveķu slodzi (0,05–0,2 mmol/g).

​